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虫媒传染病,怎么破?
发布日期:2016-10-27      阅读(613 )    返回列表
疫情如火

 2016年9月20日人民网报道,安徽铜陵市,4村民感染布尼亚病毒,其中1人死亡,疑因蜱虫叮咬,前两年,广东,河南等地也都有不少患者。布尼亚病毒科大部分能够感染动物和人类,其症状为发热性伴血小板减少,未见人际传播,主要由节肢动物传播,也可由啮齿类动物传播。经分离鉴定以后,认为是布尼亚病毒科的新型病毒。

媒传染病是由嗜血节肢动物如蚊、蜱、螨、蟑螂、虱等通过吸血传播的一类传染病,14世纪时造成7500万人死亡的黑死病(跳蚤传播的鼠疫杆菌)以及目前流行的黄热病、寨卡病毒都属于此类。

预防控制虫媒传染病的关键,在于及时准确的检测,针对性采取有效的防控措施。
        下面我们就来聊一聊虫媒传染病及诊断过程需要的多种方法和相关仪器试剂。


常见虫媒传染病及主要传播媒介
虫媒病毒:登革热(伊蚊)、乙脑(三带喙库蚊)、森林脑炎(蜱)、黄热病(蚊虫)、西尼罗河热(蚊)、发热伴血小板减少综合征(蜱)、肾综合出血热(鼠)、基孔肯雅热(伊蚊)、寨卡(蚊虫)
虫媒细菌:鼠疫(鼠蚤)
虫媒寄生虫:疟疾(按蚊)、黑热病(白蛉)
虫媒立克次体:人粒细胞无形体病(蜱)、查菲埃立克体病(蜱)、恙虫病(恙螨幼虫)、斑疹伤寒(虱、鼠蚤)
虫媒螺旋体:钩端螺旋体病(鼠、猪等)、回归热(虱、蜱)、莱姆病(硬蜱)
检测流程
虫媒病毒病:病毒分离培养较困难,诊断有赖于血清学检测结果。但可通过接种动物或敏感细胞分离病毒,分离出病毒后进行理化和生物学特性试验鉴定。
虫媒细菌病:如鼠疫菌可以直接分离病原体鉴定,也可进行噬菌体裂解试验,血清凝集试验,特异荧光抗体染色鉴定。
虫媒寄生虫病:怀疑疟疾感染时可通过显微镜或疟疾快速诊断检测法诊断。怀疑黑热病时穿刺染色镜检或培养后观察。同时可进行抗原及核酸检测。
虫媒立克次体病:该菌难以培养,对营养要求苛刻,且血中立克次体少,分离培养鉴定不宜推广。目前采用血清学检验和PCR方法进行检测。
虫媒螺旋体病:回归热螺旋体培养较困难。钩端螺旋体病和莱姆病可以通过分离培养鉴定。同时可以进行血清学和分子生物学检测。
1.标本采集
时间:怀疑细菌感染时应在急性期和抗生素使用前采集标本;病毒分离和病毒抗原检测标本,应在发病初期和急性期采样。对媒介昆虫进行采集。
部位:根据致病菌在患者不同病期的体内分布和排出部位,采集不同的标本。
容器:无菌容器、拭子、采血管、螺口塑料试管
2.分离培养鉴定
分离培养是最可靠直接的判定方法,但需要时间长,对人员技术要求高
3.血清学诊断

高度特异性敏感性,可定性定量,但会出现交叉反应。

常用血清学反应来鉴定分离到的病原菌,以最终确诊检测结果。

ELISA

酶联免疫吸附试验,是当前应用最广泛的血清学测定方法,它将抗原抗体反应的高度特异性和酶的高效催化作用结合,敏感性高,不需特殊设备,观察结果方便。市场可用来检测虫媒传染病的ELISA试剂盒很多,朋友们在使用时要根据需求认真挑选购买。

胶体金技术

免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标记物的新型免疫标记技术,成本低,不需特殊设备,标记物稳定,使用方便快速,不需培训,便于基层和现场使用,所有反应可在15分钟内完成。

目前采用胶体金免疫原理的快速检测试剂条,使用十分方便。在疟疾治疗前,WHO建议对所有疑似疟疾病例进行寄生虫学诊断检测,胶体金快速检测试条即可在很短时间内获得寄生虫学确诊结果,指导用药。

4.分子生物学诊断


       目前越来越多的实验室,采用分子生物学技术诊断病原微生物,其过程可以实现自动化,结果稳定可靠,灵敏度高,已经成为微生物实验室必备的技术手段。

核酸提取

可参照相关标准人工配置试剂,也可使用核酸提取试剂盒手工提取,但通量较高时需要很长时间,核酸质量存在差异。

核酸提取自动化系统应运而生,德国QIAGEN公司推出的QIAcube HT提供中到高通量的解决方案,专用试剂适用于如血清、血浆、尿液、粪便、痰液,细胞悬液,组织、食品等核酸的提取。

QIAcube HT
普通PCR
快速方便灵敏度高特异性强

   

普通梯度PCR扩增仪是分子生物学实验室必配的设备,Life Technologies公司的ProFlex PCR仪可配备四种加热模块,其中3 x32孔模块可同时运行三个独立模块,允许多用户同时使用,该仪器控温精确,均一性好,重现性好,升降温速度快,且仪器内置大屏触摸屏,方便编程和检查运行状态。

ProFlex PCR仪
荧光定量PCR
快速实时精确定量分析

实时荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,多重荧光定量PCR技术可同时对多个样本进行分析,已广泛应用于病原菌检测、病毒检测、基因检测、基因突变分析等各种基因分析。

Life Technologies公司推出的ViiA 7实时荧光定量PCR仪,有6个非耦合激发滤光片和发射滤光片,可实现最多的染料组合和最大的多重分析能力,孔间、批间、不同仪器间差异低,且单重反应中可检测低至1.5倍的目标数量差异。具有速度快、通量高、操作简便、结果可靠、模块灵活等优点。

ViiA 7实时荧光定量PCR仪

    目前市场上已有多种检测虫媒传染病的荧光PCR检测试剂盒。达安基因推出的荧光探针法可检测的虫媒传染病病原体就有登革热病毒、基孔肯雅病毒、黄热病病毒、西尼罗病毒、寨卡病毒、乙型脑炎、森林脑炎、无形体属、发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒、肾综合征汉城(滩)病毒、疟原虫、钩端螺旋体、鼠疫耶尔森菌等。

基因芯片
高通量并行性微量化自动化

       基因芯片又称DNA微阵列、DNA芯片,领头羊企业如Affymetrix公司,将成千上万DNA探针组成的微阵列整合在一张芯片上,通过杂交信号的强弱及位置分布,分析目的基因有无及数量。基因芯片检测的基础是核酸分子的杂交,反映的是目的基因与探针间的匹配程度,适用于对导致类似症状的未知病原体的筛查,可以在属的水平上对未知病原微生物进行分类和鉴定。优点是:操作流程标准化,重复性好,数据分析简单明确。

NGS测序
通量大检测速度快未知病原体检测

NGS技术核心特点是并行高通量测序,一次可以进行上百万个测序反应。因其快速和灵敏的检测特点已成为虫媒传染病研究的强有力工具。

NGS测序不受基因组类型限制,灵敏度高且能对不同来源的样品同时检测。所测得的序列需要进行专业的生物信息学分析。

应用NGS测序技术,结合宏基因组学分析方法,在未知病原体疾病爆发时有快速强大的鉴定能力。

Ion PGM测序仪

Life Technologies公司依靠其半导体测序技术,推出了Ion PGM二代测序平台,其核心技术是使用半导体技术在化学和数字信息之间建立直接的联系,具有简捷、扩展和快速的特性,是未来理想的解决方案。

卡尤迪现场快检方案

卡尤迪生物科技(北京)有限公司推出的现场核酸快速检测平台,是基于“一键式免核酸提取 Mini8实时荧光定量PCR检测技术”和“一滴血快速核酸现场检测技术”搭建,体积小、可移动、无需校准、操作简单、结果易判读,可在1.5h内得到结果。

该平台的使用可使出入境检验检疫局,疾病预防控制中心等相关机构在应对卫生领域突发事件的快速反应和处理能力得到质的飞跃。

该快速检测平台箱由核酸检测箱和免核酸提取检测试剂盒两部分组成。操作简便,携带方便。

便携式核酸检测箱 MD-B
免核酸提取检测试剂盒

2015年至今,该平台在口岸快速检测布尼亚病毒、寨卡等虫媒传染病方面都取得了突出的成绩,得到了世界卫生组织的认可,其中该公司Mini8便携检测系统已被WHO纳入官方推荐产品目录。

 

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参考标准
SN/T 1521-2005 输入性蠓类虫媒病毒检测规程
WS 278-2008 流行性出血热诊断标准
WS 259-2015 疟疾的诊断
WS 258-2006 黑热病诊断标准
WS 279-2008 鼠疫诊断标准
WS 290-2008 钩端螺旋体病诊断标准
WS 215-2008 流行性和地方性斑疹伤寒诊断标准
SN/T 1718-2006 出入境口岸回归热检验规程
SN/T 3392-2012 国境口岸莱姆病螺旋体检验规程
SN/T 4009-2014 国境口岸蜱类携带嗜吞噬细胞无形体的PCR检测方法