2016年9月20日人民网报道,安徽铜陵市,4村民感染布尼亚病毒,其中1人死亡,疑因蜱虫叮咬,前两年,广东,河南等地也都有不少患者。布尼亚病毒科大部分能够感染动物和人类,其症状为发热性伴血小板减少,未见人际传播,主要由节肢动物传播,也可由啮齿类动物传播。经分离鉴定以后,认为是布尼亚病毒科的新型病毒。
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预防控制虫媒传染病的关键,在于及时准确的检测,针对性采取有效的防控措施。
下面我们就来聊一聊虫媒传染病及诊断过程需要的多种方法和相关仪器试剂。
高度特异性、敏感性,可定性或定量,但会出现交叉反应。
常用血清学反应来鉴定分离到的病原菌,以最终确诊检测结果。
酶联免疫吸附试验,是当前应用最广泛的血清学测定方法,它将抗原抗体反应的高度特异性和酶的高效催化作用结合,敏感性高,不需特殊设备,观察结果方便。市场可用来检测虫媒传染病的ELISA试剂盒很多,朋友们在使用时要根据需求认真挑选购买。
免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标记物的新型免疫标记技术,成本低,不需特殊设备,标记物稳定,使用方便快速,不需培训,便于基层和现场使用,所有反应可在15分钟内完成。
目前采用胶体金免疫原理的快速检测试剂条,使用十分方便。在疟疾治疗前,WHO建议对所有疑似疟疾病例进行寄生虫学诊断检测,胶体金快速检测试条即可在很短时间内获得寄生虫学确诊结果,指导用药。
目前越来越多的实验室,采用分子生物学技术诊断病原微生物,其过程可以实现自动化,结果稳定可靠,灵敏度高,已经成为微生物实验室必备的技术手段。
可参照相关标准人工配置试剂,也可使用核酸提取试剂盒手工提取,但通量较高时需要很长时间,核酸质量存在差异。
核酸提取自动化系统应运而生,德国QIAGEN公司推出的QIAcube HT提供中到高通量的解决方案,专用试剂适用于如血清、血浆、尿液、粪便、痰液,细胞悬液,组织、食品等核酸的提取。
普通梯度PCR扩增仪是分子生物学实验室必配的设备,Life Technologies公司的ProFlex PCR仪可配备四种加热模块,其中3 x32孔模块可同时运行三个独立模块,允许多用户同时使用,该仪器控温精确,均一性好,重现性好,升降温速度快,且仪器内置大屏触摸屏,方便编程和检查运行状态。
实时荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,多重荧光定量PCR技术可同时对多个样本进行分析,已广泛应用于病原菌检测、病毒检测、基因检测、基因突变分析等各种基因分析。
Life Technologies公司推出的ViiA 7实时荧光定量PCR仪,有6个非耦合激发滤光片和发射滤光片,可实现最多的染料组合和最大的多重分析能力,孔间、批间、不同仪器间差异低,且单重反应中可检测低至1.5倍的目标数量差异。具有速度快、通量高、操作简便、结果可靠、模块灵活等优点。
目前市场上已有多种检测虫媒传染病的荧光PCR检测试剂盒。达安基因推出的荧光探针法可检测的虫媒传染病病原体就有登革热病毒、基孔肯雅病毒、黄热病病毒、西尼罗病毒、寨卡病毒、乙型脑炎、森林脑炎、无形体属、发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒、肾综合征汉城(滩)病毒、疟原虫、钩端螺旋体、鼠疫耶尔森菌等。
NGS技术核心特点是并行高通量测序,一次可以进行上百万个测序反应。因其快速和灵敏的检测特点已成为虫媒传染病研究的强有力工具。
NGS测序不受基因组类型限制,灵敏度高且能对不同来源的样品同时检测。所测得的序列需要进行专业的生物信息学分析。
应用NGS测序技术,结合宏基因组学分析方法,在未知病原体疾病爆发时有快速强大的鉴定能力。
Life Technologies公司依靠其半导体测序技术,推出了Ion PGM二代测序平台,其核心技术是使用半导体技术在化学和数字信息之间建立直接的联系,具有简捷、扩展和快速的特性,是未来理想的解决方案。
卡尤迪生物科技(北京)有限公司推出的现场核酸快速检测平台,是基于“一键式免核酸提取 Mini8实时荧光定量PCR检测技术”和“一滴血快速核酸现场检测技术”搭建,体积小、可移动、无需校准、操作简单、结果易判读,可在1.5h内得到结果。
该平台的使用可使出入境检验检疫局,疾病预防控制中心等相关机构在应对卫生领域突发事件的快速反应和处理能力得到质的飞跃。
该快速检测平台箱由核酸检测箱和免核酸提取检测试剂盒两部分组成。操作简便,携带方便。
2015年至今,该平台在口岸快速检测布尼亚病毒、寨卡等虫媒传染病方面都取得了突出的成绩,得到了世界卫生组织的认可,其中该公司Mini8便携检测系统已被WHO纳入官方推荐产品目录。
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